貼壁細胞處理方法

    一、細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。從細胞資源中心獲得細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作。

二、 鏡下觀察：

未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培養液，放入37℃、5%CO2孵箱培養；

超過80%匯合度時，按要求比例消化傳代。

三、消化方法

1、將瓶裝的完全培養液移入無菌瓶中，留待日后培養用。加消化液0.25% Trypsin-EDTA (1X), Phenol Red消化。

2、T25瓶加3ml PBS，洗一次，棄上清，再加1ml消化液消化，顯微鏡下觀察，等細胞完全脫離瓶壁分離成單個后，加培養基混勻，離心收集，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6， 1:6-1:8），每T25瓶加培養基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培養

四、若客戶收到2ml小管細胞

收到細胞以后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作；然后將小管細胞轉移至T25培養瓶，加入9ml左右含FBS的培養基混勻，放入培養箱過培養后查看細胞匯合度：若未超過80%匯合度，換液繼續培養，據情況傳代或者凍存。若超過80%匯合度，可直接進行傳代（方法同上）

    該細胞使用培養基：1、DMEM(高糖)    2、R1640    3、R1640（改良）4、MEM(EBSS)    5、MEM(NEAA)    6、D/F12    7、F12    8、F12K    9、MaCcoy‘    10、L15    

血清要求：1、20%FBS    2、15%FBS    3、10%FBS    4、5%FBS    5、2.5%FBS    6、15%HS    7、10%HS    8、5%HS    9、2.5%HS    10、10%CCF(滅活)

四、細胞代數：      復蘇人：     

凍存液：常規培養液+20%FBS+8%DMSO

上海奧陸生物